選對(duì)轉(zhuǎn)染前后以及配制轉(zhuǎn)染復(fù)合物時(shí)使用的培養(yǎng)基對(duì)于細(xì)胞實(shí)驗(yàn)的成功也十分關(guān)鍵。主要是培養(yǎng)基中的血清以及抗生素的存在與否對(duì)siRNA轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)的影響。

1、培養(yǎng)基中的血清對(duì)轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)的影響

血清中主要含有蛋白質(zhì)、生長(zhǎng)因子、激素和其他支持細(xì)胞生長(zhǎng)、附著和體外存活的成分。雖然它是細(xì)胞生長(zhǎng)必需的要素，但是對(duì)于轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)來說，血清并不是那么友好，何時(shí)使用、怎么使用都非常重要。

·在轉(zhuǎn)染前即鋪板時(shí)和轉(zhuǎn)染后建議使用只含血清不含抗生素的培養(yǎng)基，Starvio siRNA轉(zhuǎn)染試劑不同于一般的脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑，它對(duì)細(xì)胞的毒性很低，血清的存在不會(huì)影響轉(zhuǎn)染效果，并且轉(zhuǎn)染后不需要換液，操作更加簡(jiǎn)便；而脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑本身毒性就大，在轉(zhuǎn)染過程中如果含血清，還會(huì)將血清中的蛋白帶入細(xì)胞，引發(fā)細(xì)胞毒性，從而導(dǎo)致細(xì)胞死亡、轉(zhuǎn)染效率降低，所以要求在轉(zhuǎn)染前換無血清培養(yǎng)基，轉(zhuǎn)染后4-6h再更換成有血清培養(yǎng)基，這其實(shí)是為了減輕轉(zhuǎn)染造成的細(xì)胞毒性。如果實(shí)驗(yàn)者沒有好用的培養(yǎng)基，推薦使用DMEM源培L110KJ培養(yǎng)基或者RPMI-1640普諾賽PM150110培養(yǎng)基，這兩款產(chǎn)品與Starvio siRNA轉(zhuǎn)染試劑都有較好的適配性。

·另外，在配制轉(zhuǎn)染復(fù)合物的時(shí)候，若含有血清，血清中的蛋白會(huì)與轉(zhuǎn)染試劑或者siRNA結(jié)合從而干擾轉(zhuǎn)染試劑與siRNA復(fù)合物的形成，最終影響轉(zhuǎn)染效率。因此，在配制轉(zhuǎn)染復(fù)合物時(shí)，建議使用星啟百代專研的轉(zhuǎn)染增強(qiáng)劑，不僅可以完全替代無血清培養(yǎng)基，而且與Starvio siRNA轉(zhuǎn)染試劑整體搭配進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，轉(zhuǎn)染效率更高。

2、培養(yǎng)基中的抗生素對(duì)轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)的影響

抗生素本身對(duì)細(xì)胞的生長(zhǎng)并不是必須的，但是在細(xì)胞培養(yǎng)過程中，往往存在支原體、細(xì)菌、真菌等污染，添加抗生素可以很好的防止污染。與這種積極作用不同的是，如果在轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)中，添加了抗生素如常用的青霉素、鏈霉素，很可能致使細(xì)胞活性下降、轉(zhuǎn)染效率低下。原因是在進(jìn)行轉(zhuǎn)染時(shí)，轉(zhuǎn)染試劑增加了細(xì)胞的通透性，這些抗生素一般情況下確實(shí)對(duì)于真核細(xì)胞無毒，但在細(xì)胞通透性增加后，抗生素也會(huì)隨之進(jìn)入細(xì)胞，繼而損傷細(xì)胞。因此，整個(gè)siRNA轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)過程即從接種細(xì)胞開始就要避免使用抗生素。