影響siRNA轉(zhuǎn)染實驗效果的因素有各種各樣，或是轉(zhuǎn)染時細胞密度不合適、或是轉(zhuǎn)染試劑量多了、又或是siRNA濃度偏低了等等，可以說轉(zhuǎn)染實驗總在你意想不到的細節(jié)處或者某個小決定之后開始走向失敗。其實，想要把這種失敗的損失和概率降到最低，聰明的科研者一定會進行實驗條件的摸索，看似花了額外的時間，但是卻能有事半功倍的效果。這里，非常建議，尤其是對于首次轉(zhuǎn)染的同學(xué)，請選擇24孔板進行條件摸索！主要有以下理由：

1、能夠摸索出最優(yōu)實驗條件

每個細胞都有自己的“個性”，有的增殖比較快，有的增殖比較慢，而siRNA轉(zhuǎn)染試劑所要求的轉(zhuǎn)染密度是一個最適范圍，如毒性很低的Starvio siRNA轉(zhuǎn)染試劑只需要細胞密度在30-50%即可轉(zhuǎn)染，而lipo3000則要求細胞密度為70-90%。當你不確定用多少細胞數(shù)鋪板才能達到轉(zhuǎn)染實驗所需的合適密度時，就可以用24孔板接種不同數(shù)量的細胞以摸索出最佳的細胞接種數(shù)，如分別接種3.5*104、4*104、4.5*104個細胞。這樣一來，對于不同種類的細胞就可以知道哪個接種量能夠在轉(zhuǎn)染時達到需要的最適密度，并且如果以上接種數(shù)皆能達到轉(zhuǎn)染密度，也可以比較出最優(yōu)條件，即能夠使轉(zhuǎn)染效率達到最高的接種數(shù)。

又比如科研者可以通過24孔板設(shè)置不同的轉(zhuǎn)染試劑量、siRNA濃度來摸索最適條件，雖然說明書確實只提供了一種在實驗室條件下普遍能夠轉(zhuǎn)染出很好效果的比例，但對于不同實驗，不一定是最優(yōu)答案。每一個研究者都希望實驗?zāi)軌蜃龀鲎詈玫男Ч?，那這些條件的摸索是必不可少的！

2、兼顧成本與轉(zhuǎn)染效率檢測

大家或許疑惑為什么不能用大孔板拿來進行條件摸索呢，這方面考慮到很多實驗者只是初次轉(zhuǎn)染或者只是想通過小包裝來試用，那么24孔板是一種能夠同時兼顧成本以及轉(zhuǎn)染效率檢測的選擇。

所謂“成本”，并不只是指在試劑和耗材上的消耗，還有研究者的精力與時間成本?？梢哉f，做細胞實驗，往往從培養(yǎng)細胞開始就需要花費研究者很多的時間與精力，實驗試劑的開銷比起做定量、核酸提取更是昂貴了許多。因此，在正式實驗開始前，利用24孔板來摸索實驗條件是非常明智的，不僅可以最大程度地節(jié)約試劑使用量，也不影響實驗結(jié)果的檢測，如RT-qPCR等?；蛟S有同學(xué)存在疑問，24孔板培養(yǎng)的細胞數(shù)是否能夠提取出足量的RNA進行qPCR檢測？這個問題不用擔心，只要是質(zhì)量正常的RNA提取試劑，提取的RNA量完全可以滿足qPCR檢測的需要。

常常有同學(xué)在購買轉(zhuǎn)染試劑小包裝后直接上六孔板進行試驗，不是一種可取的做法。小包裝中的試劑量本來就少，用六孔板或更大的培養(yǎng)皿進行條件優(yōu)化或?qū)嶒灻?，很容易在實驗成功之前就將試劑消耗完畢。既浪費了試劑，又耽擱了時間，建議待實驗條件固定后，再進行較大孔板的轉(zhuǎn)染實驗。

總之，希望大家不要怕麻煩，成功前的每一步都不是偶然！摸索實驗條件的最優(yōu)解也是每個實驗者必備的科研素養(yǎng)哦~